专利名称：热淋清颗粒原料的醇提有效部位及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，用于制备中药热淋清颗粒的原料即药材头花寥的提取物。具体地，本发明涉及由热淋清的原料即药材头花寥的醇提取物所获得的有效部位，以及该有效部位的制备方法和用途。
背景技术：
头花寥(Polygonum capitatum Buch-Ham ex D. Don)为寥科寥属多年生草本植物。具有清热利湿、利尿通淋之功效，在临床上治疗泌尿系统感染有着显著的效果。以其为原料制成的中成药制剂“热淋清颗粒” 2004年进入国家基本医疗保险目录，2012年进入贵州省基本药物目录。 头花寥是少数民族地区的常用药，主要用于肾盂肾炎、尿道感染、利尿通淋等症。相关的药理学研究少见，目前仅有任光友等几篇报道。任光友采用大鼠细菌性肾盂肾炎模型进行实验，结果头花寥水提取物组大鼠尿液中的WBC和BLD与对照组比较明显减少，显示头花寥水提物对肾盂肾炎具有一定的抗炎作用。任光友等以小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液观察5天内小鼠死亡情况，结果对照组死亡率为100%，头花寥组死亡率分别为20%和50%，显示头花寥水提物能够对抗大肠杆菌引起的感染。任光友等以头花寥水提物灌胃给药予家兔，结果，头花寥水提物组与对照组比较，体温无显著性差异，但能降低静脉注射伤寒副伤寒菌苗引起的家兔的发热体温。任光友等，以头花寥水提物分别灌胃给药家兔、大鼠，与空白组和速尿对照组比较尿量。结果显示头花寥水提物对家兔和大鼠无明显利尿作用。徐英春等人采用琼脂稀释法检测了头花寥对10株淋病奈瑟球菌(淋球菌)的体外抑菌活性，结果头花寥对淋球菌有抑菌活性。其对10株淋球菌的最小抑菌浓度范围为8 32g/L，平均值为 11.2g/L。中国专利申请公开说明书0附0548994(中国专利申请号90107810.7，
公开日1991年10月2日)中公开了一种泌感灵冲剂、糖浆生产工艺。该生产工艺是以四季草为原料用水煎煮30-60分钟，提取液过滤浓缩，将其上清液减压浓缩成膏，再用60-70%乙醇提取，将乙醇提取液真空干燥，得四季红浸膏，进一步配制成冲剂或糖浆剂，据信其具有解毒、散瘀、利尿、通淋的功效。中华人民共和国卫生部药典委员会1998年编的中华人民共和国卫生部《药品标准一中药成方制剂》(第十七册)中收载了名为“热淋清颗粒”的中成药制剂，其是通过将头花寥加水煎煮两次后过滤浓缩制成的。CN1481832A(中国专利申请号02129686. 3，
公开日2004年3月17日)和CN1483466A (中国专利申请号03146381. 9，
公开日2004年3月24日)公开了头花寥提取物，其基本上是由以下步骤制备的a.由头花寥全草的鲜品或干品用水分两次煎煮或者用醇水混合物分二至三次回流提取，每次1-2小时，合并煎煮液，过滤浓缩至20°C时的相对密度为I. 2，喷雾干燥或减压干燥得到；或者，b.由头花寥全草及其水提药渣经二氧化碳超临界萃取得到。据信此提取物可用于抗菌、抗炎、镇痛、利尿、治疗泌尿系统结石、治疗肾盂肾炎以及前列腺炎。尽管目前有诸多关于制备头花寥提取物的报道，然而本领域技术人员仍然期待从头花寥获得更为有效的产品。

发明内容
本发明目的是期待从头花寥获得一种有效的产品。本发明人发现，使用醇提取头花寥，得到的提取物经特定的大孔树脂洗脱所获得的洗脱物，其在生物活性方面具有令人期待的效果。本发明基于此发现而得以完成。为此，本发明第一方面提供了一种头花寥提取物，其基本上由包括以下步骤的方法制备得到(I)将头花寥地上部分鲜品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如约70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次 1-3小时(例如约I. 5小时)，过滤，使滤液浓缩、干燥，得醇浸膏；(2)使醇浸膏混悬于甲醇中，超声处理O. 5飞小时(例如O. 5^3小时，例如f 2小时，例如约I. 5小时)，离心，将上清液加载到MCI大孔树脂柱(例如，每IOOg浸膏使用树脂的量为O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上；(3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100% 甲醇依次进行梯度洗脱(例如每种溶剂用量为O. 5^5倍柱体积，例如O. 5^2. 5倍柱体积，例如O. 5^2倍柱体积，例如I倍柱体积)，收集各部分洗脱液，回收溶剂，由不同溶剂洗脱获得的部位干燥，得到30%-50%之间任意浓度间隔或浓度点的甲醇洗脱物，或者它们的混合物，即得。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中步骤(3)所得甲醇洗脱物是30%甲醇洗脱物(在本发明中可简称为部位A)。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中步骤(3)所得甲醇洗脱物是35%_40%甲醇洗脱物(在本发明中可简称为部位B)。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%甲醇洗脱物(在本发明中可简称为部位C)。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%_50%甲醇洗脱物(在本发明中可简称为部位D)。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中步骤(3)所得甲醇洗脱物是30%_50%之间甲醇洗脱物的混合物(在本发明中可简称为部位X)。在本发明中，该部位X可以是部位A至部位D干燥品的混合物，亦可以是30%-50%甲醇洗脱所得混合液经除溶剂干燥后的干燥品。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中部位A中含有可水解鞣质例如二没食子酰葡萄糖。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中部位B中含有可水解鞣质例如三没食子酰葡萄糖。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中部位C中含有可水解鞣质和/或原花青素。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中部位D中含有可水解鞣质例如可水解革柔质davidiin。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其中部位X中含有可水解鞣质和/或原花青素，例如二没食子酰葡萄糖、三没食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞣质davidiin。根据本发明第一方面的头花寥提取物，其照超高效液相色谱-飞行时间-质谱联用法(在本发明中可简称为UPLC-T0F-MS)测定，结果(a)在保留时间l_3min之间显示可水解鞣质(例如二没食子酰葡萄糖)的色谱峰；(b)在保留时间3. 4-4. 4min之间(例如约3. 9min处)和保留时间4. 8-5. 8min之间(例如约5. 3min处)显示可水解鞣质(例如三没食子酰葡萄糖)的色谱峰；(c)在保留时间3. 4-4. 4min之间(例如约3. 9min处)、保留时间4. 8-5. 8min之间(例如约5. 3min处)、保留时间8. 2-9. 2min之间(例如约8. 7min处)、保留时间 12. 0-13. Omin之间(例如约12. 5min处)显示可水解鞣质的色谱峰，和/或在保留时间6. 2-7. 2min之间(例如约6. 7min处)、保留时间8. 1-9. Imin之间(例如约8. 6min处)、保留时间8. 6-9. 6min之间(例如约9. Imin处)显示原花青素的色谱峰；(d)在保留时间12. 0-13. Omin之间(例如约12. 5min处)显示可水解鞣质(例如davidiin)的色谱峰；和/或(X)显示以上(a)至(d)中所示任一或全部色谱峰；其中，UPLC-T0F-MS的测定方法如下(i)供试液配制称取适量头花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成浓度约5mg/ml的混悬液，超声使尽量溶解，混悬液稀释10倍，过滤，进样2 μ I作质谱检测；(ii)色谱及质谱分析条件色谱柱AcquityBEH C18 柱(2. IXlOOmm, I. 7 μ m)，柱温40°C ;流速0. 35ml/min;进样量2μ1 ;质谱条件离子源ESI源；干燥气体温度180°C ;毛细管电压4500eV ;检测模式负离子模式；喷雾压力2. 5bar ;干燥气(N2)流速8L/min ;扫描范围100-2000amu ;碰撞能量IOev ;以O. 1%甲酸水溶液为流动相A，0. 1%甲酸乙腈溶液为流动相B，按下表规定的程序进行梯度洗脱
权利要求
1.一种头花寥提取物，其基本上由包括以下步骤的方法制备得到 (1)将头花寥地上部分鲜品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如约70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小时(例如约I. 5小时)，过滤，使滤液浓缩、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混悬于甲醇中，超声处理O.5飞小时(例如O. 5 3小时，例如广2小时，例如约I. 5小时)，离心，将上清液加载到MCI大孔树脂柱(例如，每IOOg浸膏使用树脂的量为O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次进行梯度洗脱(例如每种溶剂用量为O. 5^5倍柱体积，例如O. 5^2. 5倍柱体积，例如O. 5^2倍柱体积，例如I倍柱体积)，收集各部分洗脱液，回收溶剂，由不同溶剂洗脱获得的部位干燥，得到30%-50%之间任意浓度间隔或浓度点的甲醇洗脱物，或者它们的混合物，即得。
2.根据权利要求I的头花寥提取物，其特征在于， 步骤(3)所得甲醇洗脱物是30%甲醇洗脱物(部位A)； 步骤(3)所得甲醇洗脱物是35%-40%甲醇洗脱物(部位B)； 步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%甲醇洗脱物(部位C); 步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%-50%甲醇洗脱物(部位D);和/或 步骤⑶所得甲醇洗脱物是30%-50%之间甲醇洗脱物的混合物(部位X)。
3.根据权利要求2的头花寥提取物，其特征在于， 部位A中含有可水解鞣质例如二没食子酰葡萄糖； 部位B中含有可水解鞣质例如三没食子酰葡萄糖； 部位C中含有可水解鞣质和/或原花青素； 部位D中含有可水解鞋质例如可水解鞋质davidiin ； 部位X中含有可水解鞣质和/或原花青素，例如二没食子酰葡萄糖、三没食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞋质davidiin。
4.根据权利要求1-3任一项的头花寥提取物，其照超高效液相色谱-飞行时间-质谱联用法测定，结果 (a)在保留时间l_3min之间显示可水解鞣质的色谱峰； (b)在保留时间3.4-4. 4min之间和保留时间4. 8-5. 8min之间显示可水解鞋质的色谱峰； (c)在保留时间3.4-4. 4min之间、保留时间4. 8-5. 8min之间、保留时间8. 2-9. 2min之间、保留时间12. 0-13. Omin之间显示可水解鞣质的色谱峰，和/或在保留时间6. 2-7. 2min之间、保留时间8. 1-9. Imin之间、保留时间8. 6-9. 6min之间显示原花青素的色谱峰； (d)在保留时间12.0-13. Omin之间显示可水解鞋质(例如davidiin)的色谱峰；和/或 (X)显示以上(a)至(d)中所示任一或全部色谱峰； 其中，UPLC-TOF-MS的测定方法如下 (i)供试液配制称取适量头花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成浓度约5mg/ml的混悬液，超声使尽量溶解，混悬液稀释10倍，过滤，进样2 μ I作质谱检测； ( )色谱及质谱分析条件色谱柱:Acquity BEH C18 柱(2· I X 100mm, I. 7 μ m),柱温40°C ;流速0. 35ml/min ;进样量2 μ I ;质谱条件离子源ESI源；干燥气体温度180°C ;毛细管电压4500eV ;检测模式负离子模式；喷雾压力2. 5bar ;干燥气(N2)流速8L/min ;扫描范围100-2000amu ；碰撞能量IOev ;以O. 1%甲酸水溶液为流动相A，0. 1%甲酸乙腈溶液为流动相B，按下表规定的程序进行梯度洗脱
5.根据权利要求1-4任一项的头花寥提取物，其特征在于如说明书第一方面任一实施方案所述。
6.一种头花寥提取物，其照超高效液相色谱-飞行时间-质谱联用法测定，结果 (a)在保留时间l_3min之间显示可水解鞣质的色谱峰； (b)在保留时间3.4-4. 4min之间和保留时间4. 8-5. 8min之间显示可水解鞋质的色谱峰； (c)在保留时间3.4-4. 4min之间、保留时间4. 8-5. 8min之间、保留时间8. 2-9. 2min之间、保留时间12. 0-13. Omin之间显示可水解鞣质的色谱峰，和/或在保留时间6. 2-7. 2min之间、保留时间8. 1-9. Imin之间、保留时间8. 6-9. 6min之间显示原花青素的色谱峰； (d)在保留时间12.0-13. Omin之间显示可水解鞣质的色谱峰；和/或 (X)显示以上(a)至(d)中所示任一或全部色谱峰； 其中，UPLC-T0F-MS的测定方法如下 (i)供试液配制称取适量头花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成浓度约5mg/ml的混悬液，超声使尽量溶解，混悬液稀释10倍，过滤，进样2 μ I作质谱检测； ( )色谱及质谱分析条件色谱柱:Acquity BEH C18 柱(2. I X 100mm，I. 7 μ m),柱温40°C ;流速0. 35ml/min ;进样量2μ I ;质谱条件离子源ESI源；干燥气体温度180°C ;毛细管电压4500eV ;检测模式负离子模式；喷雾压力2. 5bar ;干燥气(N2)流速8L/min ;扫描范围100-2000amu ；碰撞能量IOev ;以0. 1%甲酸水溶液为流动相A，0. 1%甲酸乙腈溶液为流动相B，按下表规定的程序进行梯度洗脱
7.根据权利要求6的头花寥提取物，其基本上由包括以下步骤的方法制备得到 (1)将头花寥地上部分鲜品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如约70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小时(例如约I. 5小时)，过滤，使滤液浓缩、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混悬于甲醇中，超声处理O.5飞小时(例如O. 5 3小时，例如广2小时，例如约I. 5小时)，离心，将上清液加载到MCI大孔树脂柱(例如，每IOOg浸膏使用树脂的量为O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次进行梯度洗脱(例如每种溶剂用量为O. 5^5倍柱体积，例如O. 5^2. 5倍柱体积，例如O. 5^2倍柱体积，例如I倍柱体积)，收集各部分洗脱液，回收溶剂，由不同溶剂洗脱获得的部位干燥，得到30%-50%之间任意浓度间隔或浓度点的甲醇洗脱物，或者它们的混合物，即得。
8.根据权利要求7的头花寥提取物，其特征在于 步骤⑶所得甲醇洗脱物是30%甲醇洗脱物(部位Α)； 步骤(3)所得甲醇洗脱物是35%-40%甲醇洗脱物(部位B)； 步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%甲醇洗脱物(部位C); 步骤(3)所得甲醇洗脱物是40%-50%甲醇洗脱物(部位D)； 步骤(3)所得甲醇洗脱物是30%-50%之间甲醇洗脱物的混合物(部位X)； 部位A中含有可水解鞣质例如二没食子酰葡萄糖； 部位B中含有可水解鞣质例如三没食子酰葡萄糖； 部位C中含有可水解鞣质和/或原花青素； 其中部位D中含有可水解鞋质例如可水解鞋质davidiin ;和/或部位X中含有可水解鞣质和/或原花青素，例如二没食子酰葡萄糖、三没食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞋质davidiin。
9.根据权利要求6-8任一项的头花寥提取物，其特征在于如说明书第二方面任一实施方案所述。
10.制备权利要求1-5或权利要求6-9任一项所述头花寥提取物的方法，其基本上包括以下步骤 (1)将头花寥地上部分鲜品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如约70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小时(例如约I. 5小时)，过滤，使滤液浓缩、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混悬于甲醇中，超声处理O.5飞小时(例如O. 5 3小时，例如广2小时，例如约I. 5小时)，离心，将上清液加载到MCI大孔树脂柱(例如，每IOOg浸膏使用树脂的量为O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次进行梯度洗脱(例如每种溶剂用量为O. 5^5倍柱体积，例如O. 5^2. 5倍柱体积，例如O. 5^2倍柱体积，例如I倍柱体积)，收集各部分洗脱液，回收溶剂，由不同溶剂洗脱获得的部位干燥，得到30%-50%之间任意浓度间隔或浓度点的甲醇洗脱物，或者它们的混合物，即得。
11.权利要求1-5或权利要求6-9任一项所述头花寥提取物在制备清热利湿用药，利尿通淋用药，泌尿系统感染或结石用药，肾盂肾炎用药，解毒、散瘀用药，抗菌、抗炎、镇痛用药，前列腺炎用药的药物中的用途。
12.—种药物组合物,其中包含权利要求1-5或权利要求6-9任一项所述头花寥提取物，以及任选的药学可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及热淋清颗粒原料的醇提有效部位及其制备方法和用途。具体地，本发明涉及一种头花蓼提取物，其制法包括(1)将头花蓼地上部分鲜品或干品加5-15倍量的50～90%乙醇回流提取1-3次，过滤，使滤液浓缩、干燥，得醇浸膏；(2)使醇浸膏混悬于甲醇中，超声处理0.5～5小时，离心，将上清液加载到MCI大孔树脂柱上；(3)用水，10%～100%甲醇依次进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，回收溶剂，由不同溶剂洗脱获得的部位干燥，得到30%-50%之间任意浓度间隔或浓度点的甲醇洗脱物，或者它们的混合物，即得。本发明头花蓼提取物具有如说明书所述的有益效果。
文档编号A61P13/12GK102772499SQ20121030138
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月22日 优先权日2012年8月22日
发明者唐靖雯, 姜志宏, 张丽艳, 李孟林, 梁斌, 潘梅, 谢宇 申请人:贵州威门药业股份有限公司