专利名称：防治前列腺增生的组合药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种已经应用于临床的心血管疾病治疗药物抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药，其具有前列腺上皮、间质细胞特异性和防治良性前列腺增生等相关疾病的作用。属拓展已有药物新的适应症的开发应用研究领域。
背景技术：
良性前列腺增生症(BPH)是老年男性泌尿外科最常见的疾病之一。其组织学特征一般分为5种类型，即基质增生、纤维肌肉增生、肌肉增生、纤维腺瘤增生和纤维肌肉腺瘤增生。其中以纤维肌肉腺瘤增生最为常见。前列腺增生的治疗主要是手术和非手术治疗两类。手术治疗包括的经尿道前列腺电切术(transurethral resection ofthe prostate, TURP)、经尿道前列腺切开术 (transurethral incision of the prostate, TUIP)以及开放性前列腺摘除术。但是根据美国的TURP术后长期随访，发现20%-25%的患者长期效果不够理想，术后仍有尿路梗阻症状，随访10年以上者，约15%-20%的患者需再次手术，术后发生尿失禁者有2%-4%，阳萎5%-10%，逆向射精达70%-75%。而且手术治疗创伤大，并且所应用的人群还有一定的限制，譬如年龄过大、身体其他部位的疾病导致的不能进行外科干预等等。目前，对轻、中度的BPH患者主要通过以下两种途径进行药物治疗，主要包括(I)松弛膀胱颈部、前列腺包膜和腺体内平滑肌紧张，减轻或缓解BPH所致的功能性梗阻症状，如α肾上腺素受体阻滞剂等；(2)使前列腺缩小或萎缩来减轻或消除BPH所致的机械性梗阻，诸如抗雄激素药物，5 α -还原酶抑制剂等。这些药物虽然在一定程度上具有较好的疗效，但它们还存在着相当的局限性，如α肾上腺素受体阻滞剂是针对前列腺间质增生的治标药物，可以缓解前列腺平滑肌紧张，但不能减小前列腺体积；保列治等抗雄激素药物对前列腺上皮增生有效，但由于其增加了雌/雄激素的比例长期使用可能会诱发前列腺间质增生。由于前列腺增生以间质增生为主，因此，亟待开发治疗前列腺间质增生的治本药物。多年来医学界一致公认老年及有功能的睾丸是导致BPH的两大因素。近年来越来越多的研究表明，体内雌/雄激素比例增高，雌激素效应增强参与了前列腺腺体的自稳调节和间质增生的形成。雌激素的生物学效应有着很强的组织/细胞特异性。如，处于相同激素水平的体液环境中，乳腺组织中的上皮细胞发生增殖癌变，而基质中的间质纤维母细胞则多不发生恶变，前列腺增生主要发生占前列腺体积5-10%的移行区，而前列腺癌只发生在前列腺的外周区。雌激素在雌激素受体的介导下通过基因组效应和非基因组效应发挥其生物学功能。雌激素受体主要有两种亚型，即雌激素受体α和雌激素受体β。有雌激素受体α和雌激素受体β特异性配体和拮抗剂；还有一类配体具有混合激动剂/拮抗剂活性的化合物可以与雌激素受体高亲和力结合，但其作用又不同于纯抗雌激素药物(如ICI 182，780)，在有些组织中有类雌激素作用，在有些组织中又可拮抗雌激素活性。人们将它们统称为选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator, SERM)。雌激素受体选择性调节剂他莫西芬虽对乳腺癌细胞具有一定的抑制作用，但对子宫内膜细胞却发挥着促增殖的作用，以致有引发子宫内膜癌的报道。雷洛昔芬由于它在骨质代谢方面具有拟雌激素的作用，在临床上较为成熟的应用为治疗女性绝经后骨质疏松；而其在子宫和乳腺组织中却呈现拮抗雌激素作用，即抑制乳腺上皮和子宫内膜增生。近年来，良性前列腺增生的病因学研究逐步发展，流行病学等的证据使得炎症在前列腺增生发生发展过程中起的作用也受到重视。丹参的有效成分丹参酮IIA是一种醌类化合物，并已经被报道具有抗氧化，抗炎症，舒张血管平滑肌等作用，对某些癌细胞亦具有细胞毒作用。目前大多数观点认为，丹参酮IIA结构上的菲环能够结合DNA是其细胞毒性产生的主要原因。因为呋喃-ο-苯醌部分能够在碱基附近产生活性自由基，由此导致的DNA损 伤能够杀伤多种癌细胞。而最近丹参酮IIA的雌激素活性也受到关注，因为它的结构与17-β-雌二醇类似。樊报道了丹参酮IIA通过雌激素受体依赖的途径发挥了抗炎症的效应，不仅抑制了 iNOS基因表达和NO的产生，而且抑制了多种炎症因子(如IL-I β，IL-6和TNF- α )的表达。本发明抗雌药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药，具有防治雌雄激素诱导的前列腺增生的作用，迄今为止，尚无相关报道。

发明内容
本发明的目的是提供一种防治前列腺增生的组合药物。目前，对BPH患者的临床治疗药物，主要包括(I)松弛膀胱颈部、前列腺包膜和腺体内平滑肌紧张，减轻或缓解BPH所致的功能性梗阻症状的药物；(2)使前列腺缩小或萎缩来减轻或消除BPH所致的机械性梗阻的药物的抗雄激素药物。这些药物虽然在一定程度上具有较好的疗效，但它们还存在着相当的局限性，如α肾上腺素受体阻滞剂是针对前列腺间质增生的治标药物，可以缓解前列腺平滑肌紧张，但不能减小前列腺体积；保列治等抗雄激素药物对前列腺上皮增生有效，但由于其增加了雌/雄激素的比例长期使用可能会诱发前列腺间质增生。由于前列腺增生以间质增生为主，因此，亟待开发治疗前列腺间质增生的治本药物。作为男性的附属性腺器官，前列腺的发生和功能维持需要雄激素的参与。事实上，在前列腺的间质和上皮细胞中均存在着雌激素的受体，前列腺同时也是雌激素在体内调节的靶器官。近年来越来越多的研究表明，雌激素参与了前列腺腺体的自稳调节和间质增生的形成。本发明为已经应用于临床的抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药提供了一种新的细胞特异性和药物新的适应症的用途。本发明提供的防治前列腺增生的组合药物是由抗雌激素药物雷洛昔芬注射液和丹参酮IIA注射液组成，其用药量的质量比为，雷洛昔芬丹参酮IIA=I :48。本发明提供的抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药具有协同拮抗丙酸睾酮和雌二醇引起的前列腺上皮、间质细胞增殖的作用，极其明显的减小前列腺指数。本发明提供的抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA药物新的适应症为雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药具有防治前列腺增生等相关疾病的作用。本发明的优点和积极效果本发明用雌雄激素诱导去势大鼠前列腺增生的实验动物模型，检测雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药对前列腺增生的防治作用。实验结果显示与模型组及各单独用药组相比，雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药可以明显拮抗雌雄激素诱导大鼠前列腺指数的增大(p〈0. 05);能明显降低大鼠前列腺上皮、间质细胞增值率(p〈0. 05);能够极显著的降低大鼠前列腺腺泡周围的平滑肌细胞层的厚度(P〈0. 05)。抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药具有减小大鼠前列腺指数，抑制大鼠前列腺上皮细胞、间质细胞和平滑肌细胞增殖的特异性作用。同时具有防治良性前列腺增生等相关疾病的作用。


图I为实施例I中各实验组大鼠前列腺组织标本照片；A图自右至左分别为正常组、E2/T组和E2/T+雷洛昔芬组；B图自右至左分别为正常组、E2/T组和E2/T+丹参酮IIA组；C图自右至左分别为正常组、E2/T组和E2/T+雷洛昔芬+丹参酮IIA组；D图自右至左分别为正常组、E2/T组和E2/T+保列治组。图2为实施例I中各实验组大鼠前列腺组织细胞增殖核抗原(PCNA)免疫组化染色照片(放大倍数大图为X 100倍，小图为X400倍)；A、正常组，B、E2/T组，C、E2/T+雷洛昔芬组，D、E2/T+丹参酮IIA组，E、E2/T+雷洛昔芬+丹参酮IIA组，F、E2/T+保列治组。图3为实施例I中各实验组大鼠前列腺组织a -SMA免疫组化染色照片(放大倍数大图为X 200倍，小图为X 400倍，标尺长度代表100 μ m)。A、正常组，B、E2/T组，C、E2/T+丹参酮IIA组，D、E2/T+雷洛昔芬组，E、E2/T+雷洛昔芬组+丹参酮IIA，F、E2/T+保列治组。
具体实施例方式实施例I本发明提供的防治前列腺增生的组合药物是由抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA组成，其用药量的质量比为，雷洛昔芬丹参酮IIA=I :48，即将雷洛昔芬注射液和丹参酮IIA注射液有效浓度按照I :48的比例进行混合，按照每公斤体重每天注射O. 5mg雷洛昔芬+ 24mg丹参酮IIA。抗雌药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药对雌雄激素诱导去势大鼠前列腺增生实验动物模型的影响抗雌药物雷洛昔芬的给药剂量为O. 5mg/kg · day ;丹参酮IIA的给药剂量为24mg//kg .day。雌雄激素(E2/T)溶液配方为丙酸睾酮注射液(T，25mg/mL，批号100101，上海通用药业股份有限公司)，苯甲酸雌二醇注射液(E2，2mg/mL,批号090802，上海通用药业股份有限公司)，以玉米油配制E2/T比例为I :100的混合液，其中E2浓度固定为100 μ g/
mLo将Wistar雄性大鼠随机分为6组，每组动物数为8只，分别为正常对照组、E2/T组(模型组)、E2/T+丹参酮组、E2/T+雷洛昔芬组和E2/T+雷洛昔芬+丹参酮IIA组、保列治组。正常对照组进行假手术，麻醉后无菌条件下逐层切开大鼠阴囊皮肤、包膜组织、提睾肌，牵拉睾丸，然后送回包膜组织内，缝合皮肤。其余5组行去势手术，麻醉后切开大鼠阴囊皮肤、包膜组织、提睾肌，暴露睾丸，摘除双侧睾丸和附睾，结扎残端，彻底止血，然后全层缝合，对皮后，生理盐水棉球擦净阴囊外血迹。去势后正常饲养21天后开始给药。正常对照组每日皮下注射玉米油O. lmL/300g体重，E2/T组每日皮下注射E2/T混合液O. lmL/300g体重，其余4组每日皮下注射E2/T混合液O. lmL/300g体重，同时腹腔注射丹参酮IIA或/和灌胃雷洛昔芬，连续给药21天。最后一次给药24小时后对大鼠称重，处死，剖开腹腔摘取前列腺，10%福尔马林固定，HE染色，测量并计算指标为腺泡周围平滑肌层的厚度，实验数据以均数土标准差(X 土 s)表示，采用SPSS 10. O软件包，进行方差分析及差异显著性检验。实验结果表明，E2/T组(模型组)大鼠注射E2/T 21天后，前列腺体积和前列腺指数与正常组相比明显增大(P〈0. 01)，同时丹参酮IIA组、雷洛昔芬组、雷洛昔芬+丹参酮IIA组、保列治组前列腺体积和前列腺指数与E2/T组(模型组)相比均减小(p〈0. 01);与单独的丹参酮IIA和雷洛昔芬用药相比，雷洛昔芬+丹参酮IIA具有协同拮抗大鼠前列腺指数增大的作用(P〈0.05)(图1，表I)。 E2/T组(模型组)大鼠注射E2/T 21天后，采用免疫组织化学染色方法分析细胞增殖核抗原PCNA阳性的增殖细胞分布情况(图2)。证实前列腺上皮细胞增殖率与正常组相比明显增加(P〈0. 01)，同时丹参酮IIA组、雷洛昔芬组、雷洛昔芬+丹参酮IIA组、保列治组大鼠前列腺上皮细胞增殖率与E2/T组(模型组)相比均减小(p〈0. 01)，雷洛昔芬+丹参酮IIA组大鼠前列腺上皮细胞增殖率与单独丹参酮组相近，略高于单独雷洛昔芬组(p〈0.05)(表2) ；E2/T组(模型组)大鼠注射E2/T 21天后大鼠前列腺间质细胞增指率与正常组相比明显增加(P〈0. 01)，同时丹参酮IIA组、雷洛昔芬组、雷洛昔芬+丹参酮IIA组、保列治组大鼠前列腺间质细胞增殖率与E2/T组(模型组)相比均减小(p〈0. 01)，雷洛昔芬+丹参酮IIA组前列腺间质细胞增殖率与单独雷洛昔芬组相近，明显低于与单独丹参酮IIA组(p〈0. 01)(表3);综合前列腺上皮、间质细胞阳性率结果表明雷洛昔芬拮抗雌雄激素诱导的前列腺上皮和间质细胞增殖作用大于丹参酮IIA，能显著抑制大鼠前列腺上皮和间质增生(ρ〈0· 05)。Ε2/Τ组(模型组)大鼠注射21天后，采用免疫组织化学染色方法分析表达平滑肌特异蛋白SMA的细胞分布情况(图3)。大鼠前列腺腺泡周围平滑肌厚度与正常组相比明显增加(ρ〈0. 01)，同时丹参酮IIA组、雷洛昔芬组、雷洛昔芬+丹参酮IIA组、保列治组大鼠前列腺腺泡周围平滑肌厚度与Ε2/Τ组(模型组)相比均减小(ρ〈0. 01)，雷洛昔芬+丹参酮IIA组前列腺腺泡外平滑肌厚度与单独丹参酮IIA组相近，且接近正常对照组，略低于单独雷洛昔芬组，表明丹参酮IIA拮抗雌雄激素诱导的前列腺腺泡外平滑肌增厚作用大于雷洛昔芬，可明显抑制大鼠前列腺腺泡周围平滑肌增厚(表4)。综合上述结果，抗雌药物雷洛昔芬主要拮抗雌雄激素诱导的前列腺上皮和间质细胞增殖；丹参酮IIA主要拮抗雌雄激素诱导的前列腺腺泡外平滑肌增厚；雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药可明显拮抗雌雄激素诱导的前列腺上皮、间质细胞增殖，减小前列腺腺泡外平滑肌增厚，从而拮抗雌雄激素诱导大鼠前列腺指数增大。表I为各组大鼠前列腺指数变化统计结果。
表I
权利要求
1. 一种防治前列腺增生的组合药物，其特征在于该药物是由抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA组成，其用药量的质量比为，雷洛昔芬丹参酮IIA=I :48。
全文摘要
一种防治前列腺增生的组合药物。是由抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA组成，其用药量的质量比为，雷洛昔芬∶丹参酮IIA=1∶48。本发明提供的抗雌激素药物雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药具有协同拮抗丙酸睾酮和雌二醇引起的前列腺上皮、间质细胞增殖的作用，极其明显的减小前列腺指数。雷洛昔芬和丹参酮IIA联合用药具有防治前列腺增生等相关疾病的作用。
文档编号A61K31/58GK102836164SQ20121035168
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月19日 优先权日2012年9月19日
发明者石建党, 张琚, 高秀梅, 樊官伟, 朱彦, 王超, 杜小玲, 杨睿 申请人:南开大学